ترکیب هموسیستئین تیولاکتون (HTL) با بیماری‌های قلبی عروقی مختلف مرتبط است. به تازگی گروهی از محققان دانشگاه لودز در لهستان برای اندازه گیری این ترکیب در ادرار به کمک دستگاه کروماتوگرافی مایع با کاربرد بالا ( HPLC ) روشی را توسعه داده اند که موثر، ساده و قابل تکرار است و می تواند بینش ارزشمندی برای اهداف تحقیقاتی و تشخیص بالینی فراهم نماید.

HTL  که به عنوان یک متابولیت سیتوتوکسیک هوموسیستئین شناخته می شود، به واسطه  تاثیر منفی بر ساختار و عملکرد پروتئین، با افزایش خطر حمله قلبی حاد و سکته‌های ایسکمیک ارتباط دارد. در این تحقیق هدف گروه همکاران ابداع روشی بود که کارآیی تلفیقی از روش های آماده سازی موثر نمونه با قابلیت و توان تکنیک‌های کروماتوگرافی مایع با بازده بالا HPLC  را به نمایش بگذارد.

فرایند مذکور با استخراج مایع- مایع هوموسیستئین تیولاکتون (HTL) از ادرار آغاز گردید و با استخراج دوباره به کمک اسید هیدروکلریک دنبال شد. این استخراج دو مرحله‌ای برای جداسازی HTL از سایر ترکیبات ادرار قبل از مرحله  مشتق سازی با 1-بنزیل-2-کلروپیریدیوم برومید (BBCP) ضروری بود. پس از مشتق سازی، فرآورده 2-S-پیریدیوم حاصل از هوموسیستئین با بکار گیری روش HPLC  و آشکارساز UV مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

شرایط بهینه جداسازی های کروماتوگرافیک در سیستم HPLC با بهره گیری از ستون جداسازی Zorbax SB-C18 با مشخصات 150 × 4.6mm, 5 μm و انجام شستشوی شیبدار ( گرادیان ) توسط فاز متحرکی با ترکیب 0.1% اسید استیک و استونیتریل با حد جریان ( flow rate ) معادل یک میلی لیتر بر دقیقه و در دمای 25 درجه سلسیوس حاصل گردید و با این ترتیب امکان ردیابی واضح HTL و تشخیص آن در برابر نویز پس زمینه میسر شد.

 اعتبارسنجی این روش کارآیی قابل توجه آن، از جمله صحتی در محدوده  92.56% تا 114.31% و میزان تکرارپذیری با شاخص 5.89% تا 14.25%را عیان کرده است،. با این معیارها، قابلیت روش‌ مذکور برای اندازه‌گیری دقیق HTL تا غلظت‌هایی معادل 100 نانومول در لیتر تایید شده است.

در این مطالعه مقادیری از HTL با غلظت‌هایی بین ۳۶.۶۷ و ۶۹۳.۱۲ نانومول در لیتر در دوازده مورد  از هجده نمونه ادرار گرفته شده از داوطلبان سالم یافت شد. نتایج مذکور با تایید کارایی روش آزمایش و نیز به صورت همراستا با سایر مطالعات، بر  قابلیت اعتماد اندازه‌گیری‌های HTL به روش HPLC مهر تایید زد.

با توجه به سهولت کار و کاهش زمان مورد نیاز برای آماده سازی نمونه به روش HPLC در مقایسه با سایر روش های تجزیه ای برای اندازه گیری HTL ، پیش بینی می شود این تکنیک در مطالعات آینده مرتبط با تاثیر زیستی HTL مورد توجه قرار گیرد و نقش روزافزونی در محیط بالینی و نیز درکارهای تحقیقاتی داشته باشد.

در تصویر زیر که محصول اندازه گیری HTL به روش HPLC و با شرایط توصیف شده در متن مقاله است، کروماتوگرام محلول بلانک استاندارد با خطوط نقطه چین، کروماتوگرام بلانک ادرار انسان با خط خاکستری و کروماتوگرام نمونه ادرار حاوی HTL با غلظت 1 µmol/L  قابل مشاهده است وهمانگونه که ملاحظه می شود، سیگنال آنالیت در دقیقه 2.63  ظاهر شده است.

برای اطلاع بیشترازاین تحقیق می توانید با مراجعه به لینک  https://www.nature.com/articles/s41598-025-92323-y

  متن کامل مقاله مرتبط با آن را مطالعه فرمایید.

ترجمه و اقتباس: کورش کرباسیان