محصولات کیان شار دانش

دستورالعمل کارکرد استاندارد ( SOP ) مربوط به دستگاه HPLC

نویسنده : مهدی جهرمی



1- سیم های برق (کابل پاور) مربوط به پمپ و دتکتور را به دستگاه وصل کرده و سپس به برق وصل کنید. محل اتصال آن در قسمت پشت دستگاه تعبیه شده است.



2- کابل های سریال کانکتور سفید رنگ مربوط به پمپ و دتکتور را به دستگاه و سر دیگر را به مولتی کام وصل کنید. محل اتصال آن در پشت دستگاه تعبیه شده است.



3- کابل USB مولتی کام را به رایانه متصل کنید.







4- دکمه های پاور را که در قسمت کناری سمت راست قرار دارد را روشن کنید.





5- 30 دقیقه زمان برای warm up دستگاه و لامپ زمان لازم است. در این زمان ستون را ببندید.



6- جهت ستون بر روی آن با علامت فلش مشخص شده است که جهت flow را نشان میدهد.



7- ابتدای فلش به معنای سر ستون و انتهای نوک تیز فلش به معنای ته ستون است.



8- ستون مورد استفاده را در محل مشخص شده ببندید. ابتدا مسدود کننده ابتدا و انتهای ستون را باز کنید. لوله خروجی از کانال شماره 3 بر روی اینجکتور به ابتدای ستون و لوله متصل به flow cell به انتهای ستون بسته میشود. مطمئن شوید که اتصالات به خوبی سفت شده و ستون به صورت درست و در جهت درست بسته شده است. در صورتی که در هر مرحله نشتی از ابتدا و انتهای ستون مشاهده کردید، اتصالات را تا برطرف شدن نشتی سفت کنید.





9- نرم افزار Clarity را باز کنید.



10- در ستون عمودی گزینه configuration را که با علامت آچار نشان داده شده است را انتخاب کنید (دومین گزینه)



11- گزینه LC را پیدا کنید. این گزینه مربوط به پمپ میباشد.



12- زیر گزینه LC، بر روی S1132 دوبار کلیک کنید.



13- صفحه ای باز میشود که در بالای آن گزینه COM-PORT مشخص است. بر روی گزینه چک کلیک کنید. در صورت اتصال درست سیم سفید رنگ به دستگاه و مولتی کام باید اطلاعات مربوط به پمپ نمایش داده شود. سپس گزینه OK را بزنید. در صورتی که عبارت NOT CONNECTED ظاهر شد اتصالات را مطابق مرحله 14 بررسی کنید.



14- برای بررسی اتصالات، زمانی که گزینه check زده میشود، چراغ های روی مولتی کام چشمک میزد. بررسی کنید که کابل مربوط به چراغ چشمکزن به بخش مورد نظر وصل شده باشد و در صورت نیاز تغییرات را اعمال کنید.



15- گزینه DETECTOR را پیدا کنید.



16- زیر گزینه Detector، بر روی S3245 دوبار کلیک کنید.



17- موارد ذکر شده در مرحله13 و 14 را اینبار برای دتکتور اعمال کنید.



18- گزینه OK در پایین صفحه را بزنید.



19- بر روی Login کلیک کرده و سپس گزینه ok را بزنید.



20- صفحه instrument 1- method باز میشود.



21- ابتدا باید هواگیری برای هر 4 مسیر D, C, B, A انجام شود. شیر purge را تا اندازه ای که اورینگ سیاه رنگ نمایان نشود باز کنید. این شیر بر روی قسمت پمپ به رنگ کرم مشخص شده است.



22- در نرم افزار گزینه Device monitor را انتخاب کنید. این گزینه با علامتی شبیه به دو ساعت مشخص شده است.



23- ابتدا مطمئن شوید که در کانال A بطری متانول، کانال B بطری استونیتریل، کانال C بطری آب و کانال D نیز بطری آب قرار دارد. در صورت خالی بودن هریک ابتدا بطری مربوطه را قرار داده و لوله را به محل مشخص شده برای آن وصل کنید. محل مورد نظر در قسمت پهلو سمت راست تعبیه شده است. 



24- گزینه purge را انتخاب کنید.



25- در قسمت set flow (اولین گزینه) عدد 0.5 را وارد کنید. توجه کنید عدد وارد شده را درست وارد کنید. واحد این قسمت به صورت ml/min میباشد.



26- در کانال A عدد 100 را انتخاب کنید. توجه کنید اعداد وارد شده برای کانال ها بر حسب درصد میباشد.



27- گزینه ok را انتخاب کنید. در این حالت پمپ شروع به کار کردن میکند و محلول از لوله متصل به شیر پرج خارج میشود.



28- این کار تا زمانی که مطمئن شدید هوایی داخل مسیر نیست ادامه دهید.



29- همین کار را برای کانال های D, C, B هم انجام دهید. توجه کنید در هنگام هواگیری و تغییر کانال‏ها نیاز به stop flow نمیباشد و فقط درصدها هارا در هر مرحله تغییر دهید.



30- توجه داشته باشید که گزینه مربوط به کانال D غیرقابل تغییر است و خود نرم افزار با توجه به درصد دیگر کانال ها درصد D را محاسبه میکند.



31- پس از پایان بر روی گزینه Stop flow (اولین گزینه) کلیک کنید. گزینه آن در مرحله 20 قابل مشاهده است.



32- شیر پرج را ببندید. اکنون باید مرحله شستشوی ستون انجام شود. مراحل شستشو هر کدام 10 دقیقه زمان نیاز دارد. توجه کنید در هنگام شستشوی ستون نیاز به stop flow نمیباشد و فقط مقادیر را در هر مرحله تغییر دهید.



33- گزینه purge را انتخاب کنید.



34- ابتدا سرعت 0.2ml/min و نسبت 80% حلال آلی و 20% آب قرار دهید. سپس گزینه ok را بزنید.



35- پس از 10 دقیقه سرعت را به 0.5ml/min و نسبت 60% حلال آلی به 40% آب تغییر دهید.



36- پس از 10 دقیقه سرعت را به 0.7ml/min و نسبت 40% حلال آلی به 60% آب تغییر دهید.



37- پس از 10 دقیقه سرعت را به 0.9 و نسبت 20% حلال آلی به 80% آب تغییر دهید. توجه داشته باشید که سرعت را نهایتا تا 90% سرعت مورد نظر در متد مورد نظر بالا ببرید.



38- در این مرحله باید به فشار دستگاه توجه شود. انتظار میرود با افزایش flow فشار افزایش یابد. توجه داشته باشید کم بودن یا نوسان بالای فشار به معنای وجود هوا در مسیر و یا نشتی میباشد. که باید برطرف شود.



39- پس از کاندیشن کردن و شستشوی ستون اکنون باید متد مورد نظر run شود.



40- ابتدا در صفحه instrument 1- method، در ستون عمودی گزینه دوم که شکل یک پوشه است را انتخاب میکنیم.



41- متد مورد نظر را انتخاب کرده و بر روی آن کلیک شود.



42- مجدد در صفحه اصلی instrument 1- method، اینبار گزینه Control انتخاب شود. این گزینه به شکل یک صفه کیبورد نشان داده شده است و در قسمت زیر گزینه Device monitor میباشد. پس از انتخاب control، صفحه مربوط به متد باز میشود.



43- بر روی گزینه send method در پایین صفحه و پس از آن بر روی گزینه ok کلیک کنید. توجه داشته باشید در این حالت باید در صفحه اصلی instrument 1- method، کلمه waiting مشاهده شود. اگر جمله No method send را مشاهده کردید، مجددا در قسمت کنترول گزینه send method را بزنید. این عمل را تا جایی که کلمه waiting را مشاهده کنید ادامه دهید.



44- پس از آن، در صفحه instrument 1- method بر روی گزینه Data Acquisition که با شکل یک مانیتور که خطوط پیک قرمز رنگ دارد مشخص شده است و در اولین گزینه در وسط صفحه قرار دارد کلیک کنید.



45- در این حالت شما Base line را مشاهده میکنید. در صورت عدم مشاهده خط Base line، در بالای صفحه بر روی گزینه Analysis کلیک کرده، سپس گزینه set zero را انتخاب کنید.



46- تا زمانی که خط Base line صاف شود صبر کنید. این کار مدت حدود 20 الی 30 دقیقه زمان میبرد.



47- پس از صاف شدن خط Base line، سرنگ تزریق را از نمونه پر کنید. مطمئن شوید که داخل سرنگ هوایی نباشد.



48- شیر Injector را به سمت بالا قرار دهید. Injector در قسمت پهلوی سمت چپ بر روی بخش پمپ تعبیه شده است.



49- سرنگ تزریق را در سوراخ وسط injector داخل کنید. مطمئن شوید که سرنگ به درستی در محل خود قرار گرفته است.



50- سرنگ را تخلیه کرده و شیر injector را به سمت پایین قرار دهید.



51- در این حالت باید در صفحه Data Acquisition مشاهده کنید که در قسمت پایین زمان و جذب را به صورت عدد نشان دهد.